PORCINE DETECTION KIT
UPro Real-time PCR PORCINE DETECTION KIT
Collaborating Partner
Identifikasi spesies daging yang ada dalam sampel pangan merupakan langkah penting untuk memverifikasi asal dan ketertelusuran bahan mentah, serta untuk mengontrol kualitas proses penanganan dalam produksi suatu produk pangan atau obat. UPro Real-time PCR Porcine Detection Kit merupakan kit yang dikembangkan oleh PT Prodia Diagnostic Line bekerja sama dengan Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran. Produk ini dirancang khusus untuk mendeteksi kandungan DNA babi, babi hutan, dan spesies babi lainnya dalam sampel makanan dan obat-obatan.
- Pengujian berbasis waktu nyata, tidak diperlukan elektroforesis (end point analysis).
- Spesifisitas dan sensitivitas tinggi untuk mendeteksi kontaminan DNA babi dalam jumlah kecil sekalipun.
- Proses pengujian hingga interpretasi hasil cepat dan real time.
- UPro dirancang sebagai tes multipleks untuk secara spesifik mendeteksi kandungan DNA babi dan babi hutan serta dilengkapi dengan kontrol internal yang dirancang khusus untuk mendeteksi DNA mamalia dan unggas.
Prinsip pengujian ini didasarkan pada amplifikasi PCR terhadap rangkaian spesifik spesies unik yang hanya ditemukan pada genom babi dan babi hutan. Analisis bioinformatika yang diikuti dengan desain primer yang cermat memastikan deteksi semua strain sekaligus dan mengecualikan deteksi spesies lain. Selain itu, ukuran amplikon yang pendek (~100bps) mengatasi masalah degradasi DNA, sehingga mengurangi kemungkinan negatif palsu. Sistem deteksi probe dalam kit ini menggunakan FAM® untuk DNA target dan kontrol internal menggunakan VIC/HEX®.
Kontrol positif
Kit tersebut berisi DNA babi kontrol positif untuk kontrol PCR. Setiap kali kit digunakan, setidaknya satu reaksi kontrol positif harus disertakan dalam proses. Sampel positif ini menunjukkan bahwa set primer dan probe mendeteksi spesies yang diinginkan. Jika tidak ada amplifikasi yang diamati pada kontrol positif, hasil pengujian tidak valid dan harus diulang. Perhatian harus diberikan untuk memastikan bahwa kontrol positif tidak mengkontaminasi komponen kit lainnya yang dapat menyebabkan hasil positif palsu.
Kontrol negatif
Untuk memvalidasi temuan positif, kontrol negatif harus disertakan setiap kali kit digunakan. Hasil negatif menunjukkan bahwa reagen tidak terkontaminasi selama proses berlangsung.
Pengendalian internal
Sinyal dari rangkaian universal berfungsi sebagai kontrol internal yang menunjukkan proses ekstraksi templat biologis yang valid. Hasil negatif menunjukkan bahwa jumlah bahan hewani tidak mencukupi untuk melakukan pengujian yang akurat.
Kit PCR Real-time UPro Porcine dirancang untuk mendeteksi rangkaian DNA spesifik spesies babi yang ditemukan dalam makanan dan produk kesehatan. Kit ini berisi semua komponen enzim yang diperlukan dan set primer/probe untuk amplifikasi DNA babi.
| Produk | Reagen 50 |
|---|---|
| UPro Porcine 2x Mastermix | 1 Tabung, 500 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 1 (target) | 1 Tabung, 50 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 2 (internal control) | 1 Tabung, 50 μl |
| UPro Porcine Probe 1 (target) | 1 Tabung, 25 μl |
| UPro Porcine Probe 2 (internal control) | 1 Tabung, 25 μl |
| Air Bebas Nuklir | 1 Tabung, 1000 μl |
| Positive Control | 1 Tabung, 150 μl |
| Negative Control | 1 Tabung, 150 μl |
| Procedure Kit | 1 |
Kit harus disimpan pada suhu -20°C. Siklus pembekuan/pencairan harus dijaga seminimal mungkin, dan dapat dicapai dengan membuat sejumlah komponen kit. Kit ini stabil hingga tanggal kedaluwarsa yang ditentukan.
Persiapan
• Langkah pengoperasian dilakukan di ruang bersih PCR atau area lingkungan tersendiri.
• Gunakan tip filter yang berbeda untuk setiap langkah.
• Reagen harus bersuhu dingin pada saat melakukan langkah-langkah tersebut
Persiapan reagen
• Tentukan jumlah total reaksi PCR real-time, termasuk kontrol positif dan negatif.
• Lakukan spin-down selama 3 detik untuk setiap reagen dalam kit.
• Untuk setiap sampel DNA siapkan campuran reaksi sesuai Tabel 2 di bawah ini:
| Komponen | Langkah Volume |
|---|---|
| UPro Porcine 2x Mastermix | 10 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 1 (target) | 1 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 2 (internal control) | 1 μl |
| UPro Porcine Probe 1 (target) | 0.5 μl |
| UPro Porcine Probe 2 (internal control) | 0.5 μl |
| Templat DNA (1-10 ng) atau Kontrol positif | 2 - 5 μl |
| Air Bebas Nuklease | Hingga volume total 20 μl |
| Total | 20 μl |
• Siapkan sampel templat DNA.
• Pipet 2-5 μl DNA cetakan ke dalam setiap tabung. Untuk tabung kontrol negatif, gunakan 2-5 μl air bebas nuklease atau hingga volume total 20 μl.
• Spin down sebentar untuk mengumpulkan semua reagen di dasar tabung.
Lakukan PCR sesuai protokol pada Tabel 4 di bawah ini:
| Siklus | Langkah | Waktu | Ketentuan operasi |
|---|---|---|---|
| 1 | Initial denaturation | 10 minutes | 95° |
| 45 | Denaturation | 15 seconds | 95° |
| Sticking | 60 seconds | 60° |
| No | Ct Value | Interpretasi | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sampel (FAM) | Sampel (VIC/HEX) | Kontrol Positif (FAM) | Kontrol Positif (VIC/HEX) | Kontrol Negatif | ||
| 1 | <40 | <40 | <40 | <40 | No Ct / >40 | Porcine-specific genes were detected in the samples |
| 2 | Tidak ada Ct / >40 | <40 | <40 | <40 | No Ct / >40 | Porcine-specific genes were not detected in the samples |
| 3 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | Tidak ada Ct / >40 | <40 | No Ct / >40 | Invalid, do PCR again |
| 4 | <40 / Tidak ada Ct / >49 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | <49 | No Ct | No Ct / >40 | Invalid, do PCR again |
Hubungi tim kami untuk mengetahui lebih lanjut mengenai informasi produk dan pemesanan.
Hubungi tim bantuan Teknis kami untuk pertolongan lebih lanjut terkait spesifikasi produk, layanan, dan dokumen teknis lainnya.