PORCINE DETECTION KIT
UPro Real-time PCR PORCINE DETECTION KIT
Identifikasi spesies daging yang ada dalam sampel makanan merupakan langkah penting untuk verifikasi asal usulnya dan ketertelusuran bahan baku, serta untuk pengendalian kualitas proses penanganan pada produksi suatu makanan atau produk obat. UPro Real-time PCR Porcine Detection Kit merupakan kit yang dikembangkan oleh PT Prodia Diagnostic Line bekerjasama dengan Fakultas Farmasi, Universitas Padjadjaran. Kit ini dirancang untuk mendeteksi secara spesifik kandungan DNA babi, babi hutan, dan spesies babi lainnya dalam sampel makanan dan obat.
- Pengujian berbasis real-time, tidak diperlukan elektroforesis (end point analysis).
- Spesifisitas dan sensitivitas tinggi untuk sekalipun mendeteksi kontaminan DNA babi dalam jumlah kecil.
- Proses pengujian hingga interpretasi hasil cepat dan real time.
- UPro dirancang sebagai pengujian multipleks untuk mendeteksi secara spesifik kandungan DNA babi dan babi hutan, serta dilengkapi dengan kontrol internal yang didesain spesifik untuk mendeteksi DNA mamalia dan unggas.
Prinsip pengujian didasarkan pada amplifikasi PCR dari urutan spesifik spesies unik yang hanya terdapat pada genom babi dan babi hutan. Analisis bioinformatika diikuti dengan desain primer yang cermat memastikan deteksi semua strain sekaligus dan mengecualikan deteksi spesies lain. Selain itu, ukuran amplikon yang pendek (~100bps) mengatasi masalah degradasi DNA, sehingga mengurangi kemungkinan negatif palsu. Sistem deteksi Probe dalam kit ini menggunakan FAM® untuk DNA target dan kontrol internal menggunakan VIC/HEX®.
Kontrol positif
Kit berisi kontrol positif DNA babi untuk kontrol PCR. Setiap kali kit digunakan, setidaknya satu reaksi kontrol positif harus disertakan dalam proses. Sampel positif ini menunjukkan bahwa rangkaian primer dan probe mendeteksi spesies yang diinginkan. Jika tidak ada amplifikasi yang diamati pada kontrol positif, hasil pengujian tidak valid dan harus diulang. Perhatian harus diberikan untuk memastikan bahwa kontrol positif tidak mengkontaminasi komponen kit lainnya yang dapat menyebabkan hasil positif palsu.
Kontrol negatif
Untuk memvalidasi temuan positif, kontrol negatif harus disertakan setiap kali kit digunakan. Hasil negatif menunjukkan bahwa reagen tidak terkontaminasi saat proses dijalankan.
Kontrol internal
Sinyal dari sekuens universal berfungsi sebagai kontrol internal yang menunjukkan proses ekstraksi template biologis yang valid. Sinyal yang buruk atau hasil negatif menunjukkan bahwa jumlah material hewan tidak mencukupi untuk melakukan uji yang akurat.
UPro Porcine Real-time PCR Kit dirancang untuk mendeteksi sekuens DNA spesifik dari spesies babi yang ditemukan dalam makanan dan produk kesehatan. Kit ini berisi semua komponen enzim yang diperlukan dan set primer/probe untuk amplifikasi DNA babi.
| Produk | 50 Reaksi |
|---|---|
| UPro Porcine 2x Mastermix | 1 tabung, 500 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 1 (target) | 1 tabung, 50 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 2 (internal control) | 1 tabung, 50 μl |
| UPro Porcine Probe 1 (target) | 1 tabung, 25 μl |
| UPro Porcine Probe 2 (internal control) | 1 tabung, 25 μl |
| Air Bebas Nuklease | 1 tabung, 1000 μl |
| Kontrol Positif | 1 tabung, 150 μl |
| Kontrol Negatif | 1 tabung, 150 μl |
| Kit Prosedur | 1 |
Kit harus disimpan pada suhu -20°C. Siklus pembekuan/pencairan harus dijaga seminimal mungkin, dan dapat dilakukan dengan membuat aliquot komponen kit. Kit dapat stabil hingga tanggal kedaluwarsa yang tertera.
Persiapan
•Langkah pengoperasian dilakukan di ruang bersih PCR atau area lingkungan terpisah.
•Gunakan tip filter yang berbeda untuk tiap langkah.
•Dinginkan semua reagen selama langkah kerja.
Preparasi reagen
• Tentukan jumlah total reaksi Real time PCR, termasuk kontrol positif dan negatif.
• Lakukan spin down 3 sesaat untuk tiap reagen dalam kit.
• Untuk setiap sampel DNA siapkan campuran reaksi sesuai tabel 2 di bawah ini:
| Komponen | Tahapan |
|---|---|
| [UPro Porcine 2x Mastermix] | 10 μl |
| UPro Porcine Primer mix 1 (target) | 1 μl |
| UPro Porcine Primer mix 2 (internal control | 1 μl |
| UPro Porcine Probe 1 (target) | 0,5 μl |
| UPro Porcine Probe 2 (internal control) | 0,5 μl |
| DNA Template (1-10 ng) atau Kontrol positif |
2-5 μl |
| Air Bebas Nuklease | Sampai volume total 20 μl |
| Total | 20 μl |
• Siapkan sampel DNA template.
• Pipet 2-5 μl DNA template ke tiap tabung. Untuk tabung kontrol negatif, gunakan 2-5 μl air bebas nuklease atau sampai volume total 20 μl.
• Spin down sesaat untuk mengumpulkan semua reagen di bagian bawah tabung.
Lakukan PCR sesuai protokol pada tabel 4 di bawah ini:
| Siklus | Tahapan | Waktu | Temperatur |
|---|---|---|---|
| 1 | Denaturasi awal | 10 menit | 95° |
| 45 | Denaturasi | 15 detik | 95° |
| Penempelan | 60 detik | 60° |
| No | Ct Value | Interpretasi | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sampel (FAM) | Sampel (VIC/HEX) | Kontrol Positif (FAM) | Kontrol Positif (VIC/HEX) | Kontrol Negatif | ||
| 1 | <40 | <40 | <40 | <40 | Tidak ada Ct / >40 | Gen spesifik babi terdeteksi dalam sampel |
| 2 | Tidak ada Ct / >40 | <40 | <40 | <40 | Tidak ada Ct / >40 | Gen spesifik babi tidak terdeteksi dalam sampel |
| 3 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | Tidak ada Ct / >40 | <40 | Tidak ada Ct / >40 | Tidak valid, lakukan PCR kembali |
| 4 | <40 / Tidak ada Ct / >49 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | <49 | No Ct | Tidak ada Ct / >40 | Tidak valid, lakukan PCR kembali |
Hubungi tim kami untuk mengetahui lebih lanjut mengenai informasi produk dan pemesanan.
Hubungi tim bantuan Teknis kami untuk pertolongan lebih lanjut terkait spesifikasi produk, layanan, dan dokumen teknis lainnya.