PORCINE DETECTION KIT
UPro Real-time PCR PORCINE DETECTION KIT
Collaborating Partner
Identifikasi spesies daging yang ada dalam sampel pangan merupakan langkah penting untuk memverifikasi asal dan ketertelusuran bahan mentah, serta untuk mengontrol kualitas proses penanganan dalam produksi suatu produk pangan atau obat. UPro Real-time PCR Porcine Detection Kit merupakan kit yang dikembangkan oleh PT Prodia Diagnostic Line bekerja sama dengan Fakultas Farmasi Universitas Padjadjaran. Produk ini dirancang khusus untuk mendeteksi kandungan DNA babi, babi hutan, dan spesies babi lainnya dalam sampel makanan dan obat-obatan.
- Pengujian berbasis waktu nyata, tidak diperlukan elektroforesis (end point analysis).
- Spesifisitas dan sensitivitas tinggi untuk mendeteksi kontaminan DNA babi dalam jumlah kecil sekalipun.
- Proses pengujian hingga interpretasi hasil cepat dan real time.
- UPro dirancang sebagai tes multipleks untuk secara spesifik mendeteksi kandungan DNA babi dan babi hutan serta dilengkapi dengan kontrol internal yang dirancang khusus untuk mendeteksi DNA mamalia dan unggas.
The principle of the test is based on PCR amplification of unique species-specific sequences found only in the pig and wild boar genomes. Bioinformatics analysis followed by careful primer design ensured the detection of all strains at once and excluded the detection of other species. Furthermore, the short amplicon size (~100bps) overcomes the problem of DNA degradation, thereby reducing the possibility of false negatives. The probe detection system in this kit uses FAM® for target DNA and the internal control uses VIC/HEX®.
Kontrol positif
Kit tersebut berisi DNA babi kontrol positif untuk kontrol PCR. Setiap kali kit digunakan, setidaknya satu reaksi kontrol positif harus disertakan dalam proses. Sampel positif ini menunjukkan bahwa set primer dan probe mendeteksi spesies yang diinginkan. Jika tidak ada amplifikasi yang diamati pada kontrol positif, hasil pengujian tidak valid dan harus diulang. Perhatian harus diberikan untuk memastikan bahwa kontrol positif tidak mengkontaminasi komponen kit lainnya yang dapat menyebabkan hasil positif palsu.
Kontrol negatif
Untuk memvalidasi temuan positif, kontrol negatif harus disertakan setiap kali kit digunakan. Hasil negatif menunjukkan bahwa reagen tidak terkontaminasi selama proses berlangsung.
Pengendalian internal
The signal from the universal sequence serves as an internal control indicating a valid biological template extraction process. The negative result indicates that the amount of animal material is insufficient to perform an accurate test.
The UPro Porcine Real-time PCR Kit is designed to detect specific DNA sequences of porcine species found in food and health products. This kit contains all the necessary enzyme components and primer/probe sets for porcine DNA amplification.
| Produk | Reagen 50 |
|---|---|
| UPro Porcine 2x Mastermix | 1 tube, 500 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 1 (target) | 1 tube, 50 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 2 (internal control) | 1 tube, 50 μl |
| UPro Porcine Probe 1 (target) | 1 tube, 25 μl |
| UPro Porcine Probe 2 (internal control) | 1 tube, 25 μl |
| Air Bebas Nuklir | 1 tube, 1000 μl |
| Positive Control | 1 tube, 150 μl |
| Negative Control | 1 tube, 150 μl |
| Procedure Kit | 1 |
The kit should be stored at -20°C. Freeze/thaw cycles should be kept to a minimum, and can be accomplished by making aliquots of kit components. The kit is stable until the stated expiration date.
Persiapan
• Operating steps are performed in the PCR clean room or separate environmental area.
• Use different filter tips for each step.
• The reagent must be cold temperature when carrying out the steps
Persiapan reagen
• Determine the total number of Real-time PCR reactions, including positive and negative controls.
• Perform 3-second spin-downs for each reagent in the kit.
• For each DNA sample prepare the reaction mixture according to Table 2 below:
| Komponen | Langkah Volume |
|---|---|
| UPro Porcine 2x Mastermix | 10 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 1 (target) | 1 μl |
| UPro Porcine Primer Mix 2 (internal control) | 1 μl |
| UPro Porcine Probe 1 (target) | 0.5 μl |
| UPro Porcine Probe 2 (internal control) | 0.5 μl |
| Templat DNA (1-10 ng) atau Kontrol positif | 2 - 5 μl |
| Air Bebas Nuklease | Hingga volume total 20 μl |
| Total | 20 μl |
• Prepare a DNA template sample.
• Pipette 2-5 μl of template DNA into each tube. For negative control tubes, use 2-5 μl of nuclease-free water or up to a total volume of 20 μl.
• Spin down momentarily to collect all the reagents at the bottom of the tube.
Lakukan PCR sesuai protokol pada Tabel 4 di bawah ini:
| Siklus | Langkah | Waktu | Ketentuan operasi |
|---|---|---|---|
| 1 | Initial denaturation | 10 minutes | 95° |
| 45 | Denaturation | 15 seconds | 95° |
| Sticking | 60 seconds | 60° |
| No | Ct Value | Interpretasi | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sampel (FAM) | Sampel (VIC/HEX) | Kontrol Positif (FAM) | Kontrol Positif (VIC/HEX) | Kontrol Negatif | ||
| 1 | <40 | <40 | <40 | <40 | No Ct / >40 | Porcine-specific genes were detected in the samples |
| 2 | Tidak ada Ct / >40 | <40 | <40 | <40 | No Ct / >40 | Porcine-specific genes were not detected in the samples |
| 3 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | Tidak ada Ct / >40 | <40 | No Ct / >40 | Invalid, do PCR again |
| 4 | <40 / Tidak ada Ct / >49 | <40 / Tidak ada Ct / >40 | <49 | No Ct | No Ct / >40 | Invalid, do PCR again |
Hubungi tim kami untuk mengetahui lebih lanjut mengenai informasi produk dan pemesanan.
Hubungi tim bantuan Teknis kami untuk pertolongan lebih lanjut terkait spesifikasi produk, layanan, dan dokumen teknis lainnya.